DNA Quick Ligation Kit T4原理載體及其他
本試劑盒可在室溫(22°C) 10分鐘條件下，迅速完成DNA 片段粘端或平端連接反應(yīng)。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化。可用于DNA 片段克隆，文庫(kù)構(gòu)建，TA克隆，Linker連接等。DNA Quick Ligation Kit T4原理載體及其他
DNA Quick Ligation Kit
DNA Quick Ligation Kit T4原理載體及其他
目錄號(hào)：42110
目錄編號(hào) | 包裝單位 |
42110-20 | 20次 |
42110-60 | 60次 |
Components | 42110-20 | 42110-60 |
2 xQuick Ligation Buffer | 100 ml | 300 ml |
T4 DNA ligase, 5 U/ml | 100 U | 300 U |
產(chǎn)品儲(chǔ)存：-20°C 保存，避免反復(fù)凍融次數(shù)過(guò)多。
制品說(shuō)明：本試劑盒可在室溫(22°C) 10分鐘條件下，迅速完成DNA 片段粘端或平端連接反應(yīng)。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化。可用于DNA片段克隆，文庫(kù)構(gòu)建，TA克隆，Linker連接等。
特點(diǎn)：快速、簡(jiǎn)單、粘端平端均可以在10分鐘內(nèi)完成連接反應(yīng)。
操作步驟：
1. 反應(yīng)按以下體系進(jìn)行：
5 ml | 2 xQuick Ligation Buffer |
ml | Vector DNA(30-60ng） |
ml | Insert DNA（載體摩爾數(shù)量的3倍量，插入和載體摩爾比為3:1） |
ml | 無(wú)菌水 |
1 ml（5 Weiss Units/ml) | T4 DNA Ligase |
Final Volume | 10ml |
一般最后加入T4 DNA Ligase， 充分混勻，可瞬間離心收集液體至管底。
2. 22°C連接10分鐘（一般可在PCR儀器完成）。
通常推薦22°C連接5-10分鐘 ，>3kb長(zhǎng)片段連接可以延長(zhǎng)至30分鐘。不推薦超過(guò)30分鐘，超過(guò)可能降低轉(zhuǎn)化子數(shù)量。
3. 冰上冷卻，然后直接轉(zhuǎn)化或貯存于-20°C如儲(chǔ)存于-20°C，轉(zhuǎn)化前應(yīng)該置冰上重新溶解，充分混勻后進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
說(shuō)明：
1. 轉(zhuǎn)化前不要熱滅活T4 DNA ligase，否則將降低轉(zhuǎn)化效率。
2. DNA片段體積大于4 ml的，可增加2 xQuick Ligation Buffer，總反應(yīng)體積相應(yīng)可以增至20 ml，這樣在連接體系中可加入更大體積的DNA片段。
DNA Quick Ligation Kit T4原理載體及其他
